Skip to Primary Navigation Skip to Site Navigation Skip to Main Content All 3M.com Site Map

Reductie van Hostcelproteïnen en DNA met 3M™ Zeta Plus

Dieptefiltratie wordt op processchaal veel gebruikt bij de clarificatie van celculturen voor het verwijderen van cellen en celdebris. Naast de mogelijkheden met effectieve deeltjesfiltratie kunnen 3M™ Zeta Plus-dieptefiltratiemedia, dankzij de elektrokinetische lading, echter ook oplosbare onzuiverheden adsorberen. Als het een vereiste processtap is, kan deze functionaliteit worden ingezet om zowel gastcelproteïnen als gastcel-DNA te verwijderen uit biologische processtromen die recombinante monoklonale antilichamen bevatten.

De aanwezigheid van host cell proteïnen verhoogt de turbiditeit van het eluaat van proteïne A kolom. Daardoor kan er onvoorspelbare precipitatie ontstaan en kan de steriele membraanfiltratie incidenteel verstopt raken. Hoge celdichtheden en lage levensvatbaarheid zorgen in het algemeen voor hogere concentraties van host cell proteïnen. Verlaging hiervan kan cruciaal zijn om een processtap te laten slagen. Het gebruik van Zeta Plus-filters voor het verwijderen van host cell proteïnen wordt hoogstwaarschijnlijk beïnvloed door elektrostatische interactie. Er is aangetoond dat de verlaging van het geleidbaarheidlagere turbiditeit van de vloeistof vóór filtratie leidt tot minder turbiditeit in het eluaat van de proteïne A kolom.

Als u een van deze toepassingen of uw specifieke vereisten wilt bespreken met een van onze technici, kunt u contact met ons opnemen

Zeta Plus-media bestaan uit cellulose, geïmpregneerd met silicaten en kunsthars bindmiddel, die zorgt voor positief geladen media voor een uniforme verwerkingsstroom. De media zijn verkrijgbaar als lenticulaire cartridges en als capsules voor eenmalig gebruik in hetzelfde lenticulaire formaat, volledig disposable, voor gebruik in een 3M™ Encapsulated Zeta Plus Systeem. Deze kunnen dieptefiltratiesystemen met een hoge capaciteit leveren voor celkweekclarificatie met gelijktijdige of juist afzonderlijke adsorptieve verwijdering van gastcelproteïnen.

Na een centrifugestap kan filtratie van de oogst via een Zeta Plus-systeem met formulemedia uit de 3M™ Zeta Plus EXT ZA-serie upstream van proteïne A de troebeling verminderen in het kolomeluaat dat het product met monoklonale antilichamen bevat. De effectiviteit van de reductie hangt af van de levensvatbaarheid van de oogstcelkweek. Twee fasen met tweelaags-dieptefilters uit de 3M™ Zeta Plus EXT-serie kunnen zorgen voor een systeem met een hoge adsorptiecapaciteit met robuuste opschaalmogelijkheden voor stromen met variabele toevoer. Het gebruik van dieptefiltratie in meerdere fasen vóór proteïne A kolom kan de hoeveelheid neergeslagen proteïnen tijdens uitwassing met zuur verminderen. Om de stroomsnelheid en doorvoer te maximaliseren wordt een EXT-filter met open structuur aanbevolen als dieptefilter voor de eerste fase, gevolgd door een minder open EXT-filter als dieptefilter voor de tweede fase.

Een verstoorde eerste recovery die wordt gebruikt na de celharvest kan leiden tot cel-lyse waarbij veel host cell DNA kan vrijkomen. Omdat vanwege wet- en regelgeving de concentratie DNA in het gehele zuiveringsproces downstream moet worden beperkt, heeft consequente verwijdering gedurende de eerste fasen grote voordelen. Dit kan worden gerealiseerd met Zeta Plus-dieptefiltermedia. Deze verlaging wordt aanmerkelijk versterkt door gebruik te maken van de combinatie van elektrokinetische en fysieke eigenschappen van 3M™ Zeta Plus SP EXT en 3M™ Zeta Plus ZA EXT-formules in lenticulair EXT-formaat. De clarificatie van veel zoogdier- en bacteriecel-lysaten vindt plaats bij een neutrale pH, waarbij de retentie van DNA wordt verbeterd. De verwijdering van DNA uit biologische processtromen kan in sommige gevallen worden bemoeilijkt door de aanwezigheid van celdebris en proteïnen die adsorptieve plekken proberen te bereiken. Gegevens van toepassingen in het veld laten echter zien dat het mogelijk is om een DNA-verwijdering van meer dan 3 log te bereiken voorafgaand aan de proteïne A kolom . De Zeta Plus lenticulaire cartridges of capsules kunnen eenvoudig worden opgenomen als een modulaire kolomlaadstap voor productie op grote schaal.